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简要描述:人上皮型钙黏蛋白 (E-Cad)酶联免疫检测试剂盒适用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中天然和重组E-Cad浓度。本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!
产品型号:
所属分类:Human/人检测试剂盒
更新时间:2015-11-03
人上皮型钙黏蛋白 (E-Cad)酶联免疫检测试剂盒检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人E-Cad抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的人E-Cad与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入*化的抗人E-Cad抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人E-Cad抗体与结合在包被抗体上的人E-Cad结合、*与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人E-Cad浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中人E-Cad的浓度。
人上皮型钙黏蛋白 (E-Cad)酶联免疫检测试剂盒检测前准备工作:
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶*溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超
过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。
3. 标准品: 于10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管盖,
静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为10ng/mL)。
然后根据需要进行倍比稀释(注:不要直接在反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成以下浓
度:10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/mL,标准品&样品稀释液直接作为空白
孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&
样品稀释液的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类推。
4. *化抗体工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配
制100-200μL。使用前15分钟,以*化抗体稀释液稀释浓缩*化抗体(1:100)成工作
浓度。当日使用。
5. 酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制
100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。
当日使用。
标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据实际用量来稀释,如200μL/管)
人上皮型钙黏蛋白 (E-Cad)酶联免疫检测试剂盒操作概要
1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL, 37℃孵育 90 分钟
2. 倒去孔内液体,加入 100μL *化抗体工作液,37℃孵育 60 分钟
3. 洗涤 3 次
4. 加入 100μL 酶结合物工作液, 37℃孵育 30 分钟
5. 洗涤 5 次
6. 加入 90μL 底物溶液, 37℃孵育 15 分钟左右
7. 加入 50μL 终止液,立即在 450nm 波长处测量 OD 值
8. 结果计算
人上皮型钙黏蛋白 (E-Cad)酶联免疫检测试剂盒特别说明:
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)
#: 一周内使用可存于4℃,需长时间存放或多次使用建议存于-20℃.
相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些,请在使用时量取而非直接倒出!
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