人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫检测试剂盒

简要描述：人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫检测试剂盒适用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中天然和重组TNF-α浓度。本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!

产品型号：

所属分类：Human/人检测试剂盒

更新时间：2015-11-03

人肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫检测试剂盒检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人TNF-α抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中
的人TNF-α会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入*化的抗人TNF-α抗体和辣根
过氧化物酶标记的亲和素。抗人TNF-α抗体与结合在包被抗体上的人TNF-α结合、*与亲和
素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化
物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，TNF-α浓度与
OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中TNF-α的浓度。 

人肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫检测试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结
晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶*溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超
过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 
3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，
静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为500pg/mL）。
然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓
度：500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为
空白孔0pg/mL。如配制250pg/mL标准品：取0.5mL500pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标
准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  
 
4. *化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配
制100-200μL。使用前15分钟，以*化抗体稀释液稀释浓缩*化抗体(1:100)成工作
浓度。当日使用。 
5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制
100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。
当日使用。 
标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）

人肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫检测试剂盒操作概要  

1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟

2. 倒去孔内液体，加入 100μL *化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟

3. 洗涤 3 次

4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟

5. 洗涤 5 次

6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右

7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值

8. 结果计算

人肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫检测试剂盒特别说明：

*: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）

#: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃.

相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！

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